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miRcute增強型miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒(kr211)

廠家:天根生化科技(北京)有限公司
  目錄號 規 格 價 格
KR211-01 20 μl×25 次 2280 元 
KR211-02 20 μl×50 次 4180 元 
產品簡介
miRcute 增強型miRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒采用加A 法來進行miRNA 第一鏈cDNA 的反轉錄。本試劑盒采用了雙組分形式,簡化了實驗操作流程,降低了操作失誤的可能性。本產品中的miRNA RT Enzyme Mix 包含了E.coli Poly(A)Polymerase、RTase 和RNasin。其中的E.coli Poly(A) Polymerase不但具有高效的加A 尾效率,還可特異性識別單鏈miRNA,從而避免了具有雙鏈結構的miRNA 前體的進一步逆轉錄反應;RTase 經過分子改造,去掉了RNase H 活性,增加了RNA 模板親和力,從而使得miRNA 的逆轉錄反應具有更高的效率和靈敏度。本產品中的2× miRNA RT Reaction Buffer包含了miRNA 加A 尾反應和逆轉錄反應的所有原料和引物,并經過精心優化,可保證miRNA 3’ 末端的Poly(A) 修飾過程和逆轉錄過程同時高效進行。

產品特點
1. 省時省力。本試劑盒將miRAN的加A尾反應和逆轉錄反應合二為一,在減少操作步驟的同時也節省了一半的反應時間。另外,本試劑盒為雙組分形式,操作過程中只需加入RNA模板和兩個組分即可進行miRNA的逆轉錄反應,進一步簡化了操作。
2. 特異性強。本試劑盒中的E.coli Poly(A) Polymerase和RTase都只針對單鏈的miRNA進行修飾和逆轉錄反應,因此可最大程度的避免具有二級結構的miRNA前體進行逆轉錄反應。
3. 靈敏度高。本試劑盒通過將加A尾反應和逆轉錄反應的整合實現了miRNA的加A產物可全部進行進一步的逆轉錄反應,大大提高了低豐度miRNA的檢出率。
4. 適用廣泛。本試劑盒可針對幾乎所有材料提取的miRNA進行逆轉錄反應,模板的使用范圍可達20 pg~2 μg(質量范圍)和10 fM~100 pM (濃度范圍)。

儲存條件
收到本產品后,請立即置于-20℃下保存。從-20℃取出使用時,將miRNA RT EnzymeMix需放在冰中備用;將凍存的2×miRNA RT Reaction Buffer融解,融解后輕輕顛倒混勻,待溶液完全均一后再行使用。
本產品于-20℃下可保存1年。

運輸條件
干冰運輸。

下游應用
染料法/ 探針法miRNA 的熒光定量研究

注意事項
注:本試劑盒須與miRcute Plus miRNA 熒光定量檢測試劑盒(FP411) 配套使用


圖1. 使用TIANGEN miRcute 增強型miRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒(KR211) 分別與國外知名Q 公司( 左) 和國內T 公司( 右) 的同類產品反轉錄人類miRNA mimics mix,之后用熒光定量檢測
hsa-miR-133a-3p。結果顯示,對于同一RNA 樣本,與競品( 藍色線)相比TIANGEN KR211( 紅色線) 反轉錄之后得到的cDNA 量更大。KR211 具有更高的反轉效率。miRNA mimics mix 上樣量:2×108 copies;反轉錄體系:20 μl,取2 μl 定量;定量試劑:TIANGEN miRcute 增強型 miRNA 熒光定量檢測試劑盒(SYBR Green) (FP411);使用儀器:ABI 7500 fast。


圖2. 使用TIANGEN miRcute 增強型miRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒(KR211,上排) 與國外知名Q 公司( 下排) 的同類產品分別反轉錄人類Total RNA,之后用熒光定量檢測hsa-miR-122-5p。結果顯示,對于同一RNA 樣本,與競品相比TIANGEN KR211 具有更高的靈敏度和穩定性,更適合下游實驗。Human Huh7 細胞Total RNA 提取采用TRNzolUniversal (DP424)。反轉錄上樣量:100 ng-1 pg;反轉錄體系:20 μl,取2 μl 定量;定量試劑:TIANGENmiRcute 增強型 miRNA 熒光定量檢測試劑盒(SYBRGreen)(FP411);使用儀器:ABI 7500 fast。
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